本发明公开了一种氨基酸螺旋阵列薄膜及其制备方法，该氨基酸螺旋阵列薄膜包括基底和均匀沉积在基底上的氨基酸螺旋阵列；每个氨基酸螺旋由带有修饰基团的氨基酸自组装得到；氨基酸选自二十种常见天然氨基酸或其相邻同分异构体中的一种或多种；修饰基团包括N端保护基团、C端保护基团，N端保护基团选自苄氧羰基、脂基、叔丁氧羰基、9‑芴甲氧羰基中的一种或多种；C端保护基团选自硝基苯酯、脂氧基、酰胺基中的一种或多种。制备得到的氨基酸薄膜上，氨基酸自组装体呈螺旋状阵列排布，且所有的螺旋旋向统一，并可对其旋向进行调控。该氨基酸螺旋阵列薄膜的形貌特征对于其物理化学性质以及相关领域功能器件的设计开发及应用具有十分重要的意义。