本发明公开了一种核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1)待测核酸序列的扩增：所用的正向引物和反向引物均为带有标记物的特异性扩增引物，扩增产物为双链DAN产物，所述双链DNA产物两端均带有标记物；2)对扩增的双链DNA产物进行检测：所用检测工具为层析试纸条，所述层析试纸条含有显色物，所述显色物附着有能够与步骤1)中的标记物结合的配对标记物，检测温度为室温，检测结果通过层析试纸条的显色判断；所述层析试纸条自样品端至手柄端依次形成有显色物线、靶标检测线和质控检测线；仅当标靶检测线和质控检测线均显色时，判断为阳性。本发明检测时间短，无需使用特定的检测仪器，成本较低，准确度高，且操作方便。