本实用新型公开了一种一体式贴壁细胞培养分离装置，包括培养箱、培养机构和调节机构；培养箱：其上方开口处通过铰链铰接有箱盖，培养箱的下表面设有两个对称分布的垫板；培养机构：包括安装方板，所述安装方板数量为两个，两个安装方板均放置于培养箱的内部，两个安装方板之间设有均匀分布的弹片，安装方板的相对内侧面四角处均设有伸缩柱，前后相邻的两个伸缩柱的伸缩端之间均设有连接块；调节机构：设置于两个安装方板之间左右两侧，还包括PLC控制器，所述PLC控制器设置于培养箱的前侧面下端，PLC控制器的输入端电连接外部电源，该一体式贴壁细胞培养分离装置，能够使细胞与培养部件进行快速的分离。