本发明提供一种高尔基体靶向的共价结合蛋白的光热试剂及其制备方法和应用，属于生物医药和疾病治疗技术领域。本发明的光热试剂具有对高尔基体主动靶向能力，而且能与高尔基体内带巯基的蛋白共价结合，成功地将光热试剂锚定在蛋白上。在808nm激光的照射下，该光热试剂产生的热量直接作用于高尔基体内的蛋白，造成蛋白失活进而使高尔基体功能紊乱，最终诱导细胞凋亡。该策略不仅增加了分子光热剂在高尔基体中的积累，而且有效地减少了热量损失。通过体内体外的系列实验证明，该光热剂能够有效地抑制肿瘤生长，不会对正常组织造成损伤，因此具有良好的实际应用价值。