本发明涉及外泌体提取技术领域，且公开了一种基于超滤和亲和层析技术分离血清血浆中外泌体方法，包括以下步骤：1)样品处理：血清或者血浆离心5000g，20min，取上清；2)超滤：将上清用0.45um滤膜过滤，收集过滤后的液体；3)亲和层析：用同时含由CD9\CD63\CD81三种抗体的亲和层析介质进行亲和层析；4)收集外泌体；5)进行各项检测，各项检测包括NTA检测、外泌体样品透射电镜检测以及Wb检测。该基于超滤和亲和层析技术分离血清血浆中外泌体方法，采用联合超滤和亲和层析法结合，相对于亲和层析法，将得率从8.9E+8Particles/mL提升到1.2E+10Particles/mL，相对于超滤法，NTA检测结果由杂峰变为单峰，能明显提升外泌体的得率以及纯度，可以更好的应用于下游的NTA、电镜以及wb检测。