本发明涉及一种沙地云杉根尖细胞原生质体的解离方法，包括如下步骤：步骤(1)，组织培养成熟沙地云杉种子，获得沙地云杉的根尖组织；步骤(2)，将沙地云杉根尖剪成约1mm的薄片，浸泡到酶解液体系中，黑暗条件下进行酶解反应；步骤(3)，使用40μm无菌细胞滤器将经步骤(2)得到的酶解初级产物进行过筛处理，收集到新的试管中，低速离心，弃上清；步骤(4)，将经步骤(3)获得的沉淀加入清洗液重悬，低速离心，弃上清，再次加入清洗液重新悬浮原生质体，并且用显微镜细胞计数板和台盼蓝染色检测细胞浓度、活性。本发明实现了沙地云杉根尖原生质体的解离，能够快速、高效地制备出沙地云杉根组织的原生质体细胞。