本发明公开了一种软性神经探针的单面硬化涂层制备方法，首先将探针的电极点所在正面向下，与热剥离胶带紧密粘合；然后在探针上方滴涂蚕丝蛋白溶液，通过调节溶液浓度、旋涂速度和旋涂次数，并充分烘干，得到厚度精确可控的单面硬化涂层；最后对热剥离胶带进行加热，胶带失去粘性随即与探针分离，探针电极点所在正面暴露出来。相对于传统钢针辅助植入或双面硬化涂层包裹植入，在软性神经探针无电极点一侧构建单面硬化涂层，不仅有利于植入过程中保证电极点快速采集神经信号并据此调整探针位置，且电极点一侧与软脑组织弹性接触，可进一步减小穿刺过程对组织造成的切割创伤，具有重要的实用价值和创新意义。