本申请提出一种旋转式三维光激发装置，其特征在于：包括旋转基座、潜望镜组、光调制装置及样本容器，潜望镜组安装在旋转基座上，光调制装置的光束沿旋转基座的旋转中心轴进入潜望镜组内，潜望镜组将光调制装置的光束偏移至与旋转基座的旋转中心轴相交处，且其交点位于样本容器内，本申请和现有技术相比所具有的优点是：光束被光调制装置调制后，经过旋转基座上潜望镜组的偏移，且在旋转基座的旋转下，能够从不同的角度照射进入样本容器内的样本，且不同角度不同形状的光束相叠加，以激发出三维空间中的特定三维形状，从而提升了三维光激发的效率，且样本容器无需移动，方便更换。