本实用新型涉及实验器具技术领域，且公开了一种分离式细胞培养皿，包括培养皿本体和上顶盖，所述培养皿本体内腔的底部活卡接有橡胶圈，所述橡胶圈的顶部固定粘接有玻璃板，所述玻璃板的顶部开设有培养槽，所述玻璃板的顶部固定连接有连接座，所述连接座的顶部固定连接有提拉杆，所述培养皿本体的外侧面固定安装有卡座。该分离式细胞培养皿，通过设置玻璃板和设置在玻璃板上的培养槽可以将细胞进行分离培养，而且玻璃板可以拿出在培养完成以后的清洗比较方便，通过设置橡胶密封筒和针型头以及连通管座的配合使得该装置进行使用时直接使用注射器进行注射即可，此时细胞液不会与外界空气有较多的接触进而防止细胞液被污染。