一种提高铅结合蛋白特异性的定向进化方法
授权
摘要
本发明公开了一种提高铅结合蛋白特异性的定向进化方法，步骤为：(1)采用易错PCR技术扩增铅结合蛋白基因pbrR，连入含有双向筛选系统的筛选质粒；(2)转化宿主细胞E.coli DH5α，涂布筛选平板进行定向筛选；(3)对筛选得到的突变体蛋白M(PbrR‑C134R)进行初步评估。本发明应用定向进化技术以定向改造三维结构未知的铅结合蛋白，进一步减弱锌离子干扰提高铅结合蛋白的特异性。通过定向筛选和突变体蛋白初步评估，分析确定与铅结合蛋白特异性相关的氨基酸突变位点，为初步解析铅结合蛋白与金属离子结合特异性的关系奠定了基础。同时为定向改造同家族结构未知金属调控蛋白的特异性提供了新颖且简便的改造策略。
基本信息
专利标题 ：
一种提高铅结合蛋白特异性的定向进化方法
专利标题（英）：
暂无
公开（公告）号 ：
CN109136236A
申请号 ：
CN201810900750.2
公开（公告）日 ：
2019-01-04
申请日 ：
2018-08-09
授权号 ：
CN109136236B
授权日 ：
2022-05-13
发明人 ：
贾晓强赵婷婷
申请人 ：
天津大学
申请人地址 ：
天津市津南区海河教育园雅观路135号天津大学北洋园校区
代理机构 ：
天津一同创新知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人 ：
王丽
优先权 ：
CN201810900750.2
主分类号 ：
C12N15/31
IPC分类号 ：
C12N15/31 C12N15/70 C07K14/195 C12Q1/04
IPC结构图谱
C
C部——化学；冶金
C12
生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
C12N
微生物或酶；其组合物；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基。
C12N15/00
突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体或其分离、制备或纯化；所使用的宿主
C12N15/09
DNA重组技术
C12N15/11
DNA或RNA片段；其修饰形成
C12N15/31
编码微生物蛋白质，如内毒素的基因
法律状态
2022-05-13 ：
授权
2019-01-29 ：
实质审查的生效
IPC(主分类) : C12N 15/31
申请日 : 20180809
申请日 : 20180809
2019-01-04 ：
公开
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
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