本发明涉及一种固定化生物催化剂的制备方法。该方法是以无毒的聚乙烯醇复合材料为载体，先将其制成混合水溶胶，并按比例加入微生物细胞或酶，均匀混合后在多价金属离子溶液中初步形成规则的球形粒子，粒子再经多次冷冻与部分风干过程，然后再置于低浓度的致孔剂中，便可得到所需的固定化细胞或酶粒子。按本方法所制成的固定化生物催化剂粒子，酶活高、机械强度好、耐磨损、抗挤压、内部具有丰富网状结构，应用时通透性好，传质阻力小。